Это анимационное продолжение популярной франшизы «Ночь в музее», созданное специально для семейного просмотра. Действие разворачивается в залах знаменитого американского музея естественной истории, где после захода солнца обычные экспонаты обретают жизнь — если ты знаешь их секрет. Главный герой — подросток Ник, младший сын бывшего ночного охранника музея Ларри Дэлримпла.
Скрипачка Люси живет размеренной жизнью, полностью посвящая время карьере и не строя грандиозных планов на личном фронте. Перед расставанием ее бывший парень оскорбляет ее, называя слишком замкнутой и нелюбопытной, и эта обида становится для нее толчком к переменам. Девушка составляет список самых безумных поступков, которые никогда не решалась совершить раньше: от посещения стриптиз-шоу до...